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细胞学方法研究植物种质资源主要是应用染色体分析技术。
其原理是基于植物都有相对稳定的染色体数目、大小、形态和结构,它可以反映一个种甚至变种、品种与其它种、变种或品种的差异。
1、染色体组分析(genomeanalysis)
分析植物细胞内染色体数目、染色体组的组成和其减数分裂时的行为特征等,其方法主要是通过杂交了解来自不同物种的染色体配对情况,从而判断其亲缘关系程度。
染色体数目的鉴定是植物种质资源细胞学研究中最常用的方法,染色体数目鉴定的内容包括染色体基数、多倍体、非整倍体、B染色体和性染色体等。
染色体组(Genome):遗传学上把一个正常配子中所包含的染色体数,称为染色体组,用n表示。
染色体基数:指在呈多倍性的一系列数列中为最小的单倍染色体数,以x表示。
多倍体(polyploid):体细胞中含有三个以上染色体组的个体。分为同源多倍体和异源多倍体。如:小麦是山羊草属、广义的冰草属和小麦属3个属的种类杂交形成的,染色体组为AABBDD,是2n=42的异源6倍体植物。
非整倍体(Aneuploid):非整倍体是整倍体染色体中缺少或额外增加一条或若干条染色体。
B染色体,也称超数染色体:是某些动、植物细胞核中除正常染色体(A染色体)外的一类数目不定的染色体,多为组成性异染色质组成。
染色体数目对于研究种质资源系统发育过程中物种间的亲缘关系,特别是对于植物近缘类型的分类具有重要意义。
细胞学方法鉴定染色体数目通常以体细胞染色体数目为准,原因在于:在体细胞中。由于有丝分裂过程中染色单体均等分裂,使得同一个体中染色体数目保持相对的稳定性。
染色体数目统计一般应统计30个以上的细胞,其中85%以上细胞具有稳定一致的染色体数,才可作为该物种的染色体数目。
2、染色体核型分析(karyotypeanalysis)
染色体核型分析:染色体核型分析是分析生物体细胞内的染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体大小等特征,其分析常以体细胞分裂中期染色体为研究对象。
染色体的长度差异有两种:1)不同种、属间染色体组间相对应的染色体的绝对长度的差异,2)同一套染色体组内不同染色体的相对长度差异。
染色体绝对长度=放大的染色体长度(μm)×1000放大倍数。在放大的照片或图片上测量。
绝对长度稳定性差,只有在染色体大小差异明显种或者属间比较具有价值。
染色体相对长度=(染色体长度染色体组总长度)×100%(Leven1964年)。
由于相对长度排除了因技术原因引起的染色体缩短程度不同所产生的差异,所以数据比较稳定。
染色体臂比=长臂(L)短臂(S)。
由于染色体长臂和短臂不一,着丝点的位置不同,根据臂比指数对染色体着丝点位置进行命名
核型分析中,次缢痕或核仁组织区(NOR)和随体的数目、分布和大小的差异。是区分某些近缘种或属的主要特征。
次缢痕(secondaryconstriction):是染色体上主缢痕以外的另一个凹陷。
随体(satelliye):在某些染色体短臂上连接着一个或几个球形小体,这个球形结构成为随体。具有随体的染色体叫SAT染色体。染色体上随体的大小形状和位置时固定,也是识别染色体的指标之一。
3、染色体带型分析(chromosomebandingpatternanalysis)等.
以染色体带纹的数目、部位、宽窄与浓淡等具有相对稳定性的特征为依据,借助特殊的理化方法及染料进行染色,使染色体显现出深浅不同的染色体带纹特征(异染色质着色),进而进行分析的方法。
染色体显带显示了染色体纵向的内部结构分化,为揭示染色体在成分、结构、行为、功能等方面的奥秘,提供了更详细的信息。
植物染色体显带主要有荧光显带和Giemsa显带。
C带:用酸、碱或高温处理,之后在60℃温度下进行复性,之后用Giemsa染料染色,染色体的不同部分就会出现深浅不同的带纹,将深色带纹区称为C带。
由于异染色质在染色体上所处的位置不同,C带可分着丝粒带、端粒带、副缢痕带及中间带等。
N带(R带):用NaH2PO4在88℃温度下处理染色体制片,而后用Giemsa染色,显现出来的带叫R带。
G带:通过碱-盐溶液或胰蛋白酶对染色体制片进行预处理,然后用Giemsa染料染色,在染色体全长上显现出异染色区染色深的带纹,叫G带。
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